中国API、仿制药、复杂制剂在过去十年里把ANDA递交做成了产业级动作。但当我们仔细看FDA每年公布的Refuse to Receive（RTR）和Complete Response Letter（CRL）信中的拒收理由时，"impurity limits not adequately justified"、"impurity reference standard not qualified"反复出现。这是一个看似细节、却足以让一份耗资数百万美元的ANDA被打回的环节。
对照品（reference standard）和杂质对照品（impurity reference standard）是CMC包里的"度量衡"。没有它们，所有HPLC峰、所有规格限度、所有放行数值都没有锚。在中国出海项目里，对照品的供应、资质、文档常常被当成采购问题处理，而实际上它是一个跨QC、QA、RA、研发、采购的复杂质量决策。
这篇文章不讲对照品的化学，讲对照品的工程化——怎么在ANDA、NDA、BLA项目里把对照品供应商管成可审计、可追溯、可桥接的能力。
三级对照品体系：USP/EP/JP的边界与FDA的接纳
监管层面，对照品有清晰的三级结构。
Primary reference standard（一级对照品/Compendial reference standard）：USP、EP、JP（日本药典）、ChP（中国药典）、BP、IP（印度药典）以及NIST（美国国家标准与技术研究院）发布的物质。这一类标准的特点是：在监管递交里"无需额外资质审查"。FDA和EMA都直接接受USP/EP的对照品作为primary reference使用。USP明确：对照品在新批次发布后的1年内被认为是适用的（current lot），之后变为previous lot。
一级对照品的局限：USP-NF含有5000多个质量标准，但杂质对照品的覆盖度远低于API对照品。一份仿制药的关联物质（related substances）测试里，可能有6-8个特定杂质需要标定，但USP通常只覆盖其中2-3个。其余的，申请人要自己解决。
Secondary reference standard（二级对照品/Working standard）：由实验室自己制备或从商业渠道购买，相对primary standard做qualification。Sigma-Aldrich（Merck）的Pharmaceutical Secondary Standards系列、LGC、TRC（Toronto Research Chemicals）、SynThink、ResolveMass、CDN Isotopes、Veeprho等商业供应商提供大量二级对照品。
二级对照品的关键文档要求：（1）对primary standard的可追溯性证据；（2）用质量平衡（mass balance）或qNMR等方法做的纯度认证；（3）符合ISO Guide 17034和ISO 17025的认证证书；（4）按ISO Guide 31写的comprehensive certificate。
FDA、EP都接受二级对照品，但前提是它们对primary standard的可追溯性能被证明。这是中国实验室在做ANDA时常被发CRL的点：买了一份"看起来像primary standard"的二级标准，但供应商提供的documentation不足以证明可追溯性。
Tertiary / in-house working standard：实验室自己合成或精纯的对照品。常见于杂质标准——商业渠道买不到，只能合成。这一层资质要求最重：除了完整的合成路线、结构鉴定（IR、MS、1D/2D NMR、X-ray crystallography视情况），还要做purity assessment（HPLC、GC、KF water、ROI、residual solvents、elemental analysis、DSC、XRPD等），以及和primary standard或被表征良好的reference做的side-by-side对比。
杂质对照品的特殊性：ICH Q3A/Q3B触发的供应难题
杂质对照品（impurity reference standard）的供应问题，源于ICH Q3A和Q3B的阈值体系。
ICH Q3A（drug substance）的阈值（最大日剂量≤2g时）：
- Reporting threshold（报告阈值）：0.05%
- Identification threshold（鉴定阈值）：0.10%或1.0mg/天（取低者）
- Qualification threshold（资质阈值）：0.15%或1.0mg/天（取低者）
ICH Q3B（drug product）的阈值根据剂量的不同有更细的分层。
实际意义：任何impurity如果含量超过identification threshold，必须做结构鉴定；超过qualification threshold，必须做毒理学qualification。无论是identification还是qualification，都需要一份明确的reference standard。
FDA的RTR决定里反复出现的拒收理由之一：proposed limits for specified identified impurities are above qualification thresholds（ICH Q3A, Q3B）。意思是，申请人提出的杂质限度超过了qualification threshold，但没有提供足够的资格化证据（reference standard + 毒理学数据 + 既往药品里的暴露证据等）。
中国仿制药公司在ANDA里反复出问题的几个场景：
场景一：参比制剂（RLD）里的杂质，仿制药里观察到了，但浓度更高。需要做"justify by RLD comparison"：拿RLD现行有效期内、且按标准条件储存的样品做对比，证明仿制药的杂质水平不高于RLD。这里的瓶颈是：RLD不容易买到（特别是某些处方药），即使买到也可能没有足够近的lot能用于稳定性桥接。Reference standard在这里的作用是"标定两个产品里的同一个杂质，确保对比的可比性"。
场景二：杂质是API的significant metabolite。例如aspirin的salicylic acid。这种情况下，可以参考metabolite在临床使用中的暴露数据来支持高限度。但仍然需要reference standard做quantification。
场景三：自合成的杂质对照品资质不足。中国仿制药公司有大量内部合成的工艺杂质对照品。问题在于：（a）合成路线没有完整记录；（b）结构鉴定不充分（特别是stereochemistry、polymorphism）；（c）纯度评估只做了HPLC纯度，没做mass balance；（d）批次间的等效性没有bridging数据。
场景四：nitrosamine对照品的特殊难题。2018年以来的nitrosamine浪潮，催生了大量NDSRI（nitrosamine drug substance-related impurities）对照品需求。FDA 2024年发布的Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs指南要求detection limit达到AI（acceptable intake）limit的30%或更低。对应到对照品上，意味着需要更高纯度、更严格质控的标准物质。FDA对NDSRI mitigation的截止日期从2025年8月推迟到接受progress reports，2026年仍是nitrosamine相关递交的高峰期。
中国出海项目里的几个具体痛点
把上面这些原则映射到实际项目，下面这些痛点反复出现。
痛点一：USP一级对照品的"availability gap"。USP对照品发布新批次后，旧批次进入"previous lot"状态，但很多杂质对照品供应紧张，甚至阶段性out of stock。中国实验室提前几个月下单，可能仍然拿不到。这种情况下，实验室常常临时切换到二级对照品或自合成对照品，但切换的文档桥接（bridging documentation）做得不充分。在FDA审评时，反映为"reference standard during ANDA pivotal stability study cannot be traced to a primary standard"。
应对：建立rolling stock机制。核心对照品（API主对照品 + 关键杂质对照品）至少保有2年用量。一级对照品到货后立即做内部qualification和分装，准备好可作为working standard使用的多份子样。所有分装、储存、使用记录纳入quality system。
痛点二：二级对照品供应商的认证文件不被FDA认可。某些价格便宜的二级对照品供应商提供的CoA只有HPLC purity，没有mass balance、没有NMR结构确认、没有ISO 17034/17025认证。这类对照品用在ANDA里，被FDA要求补充documentation的概率很高。
应对：建立"approved reference standard supplier list"。准入标准至少包括：ISO Guide 17034和ISO/IEC 17025认证、对primary standard的可追溯性证据、comprehensive CoA（含purity by mass balance、identity by FTIR/NMR/MS、uncertainty estimate）、稳定的supply chain。Sigma-Aldrich Pharmaceutical Secondary Standards、LGC ANALYTICAL STANDARDS、TRC、Mylan、Sigma RM grade等是常用入选名单的供应商。中国本土的TLC PharmaChem、上海安谱实验科技、阿拉丁试剂正在逐步建立类似的认证体系，但出海项目里仍以欧美供应商为主。
痛点三：自合成杂质对照品的资质化深度不够。中国仿制药公司常常用自己合成的杂质做ANDA的pivotal stability、process validation、release testing。监管的痛点不是"不能自合成"，而是"自合成对照品的qualification dossier不够厚"。
应对：自合成对照品的qualification应至少覆盖：
- 完整的合成路线（描述合成步骤、试剂、催化剂、purification方法）
- 结构表征：FTIR、1H NMR、13C NMR、2D NMR（COSY、HSQC、HMBC）、HRMS、必要时X-ray
- 物理化学表征：DSC、TGA、XRPD、specific rotation（手性化合物）
- 纯度评估：HPLC purity（含至少一种正交方法）、qNMR、KF water、ROI、residual solvents（GC）、related substances by HPLC、可能的elemental impurities (ICP-MS或ICP-OES)
- 稳定性研究：至少12个月的real-time stability，确定retest date或expiration date
一份完整的qualification dossier通常有50-100页的documentation。这是CMC团队的核心工作产出之一。
痛点四：批次间的桥接（lot-to-lot bridging）缺失。每一新批的reference standard，无论是primary还是secondary，都需要做qualification against the previous lot。中国实验室的常见错误是：直接把新批次拿来用，假设供应商保证了批次间一致性。
应对：每个新批次到货时做qualification：
- 通过HPLC等正交方法做新旧批次的side-by-side identity对比
- 比较纯度数值的差异（一般要求|Δpurity| ≤ 0.5%）
- 比较关键功能性参数（如UV absorbance、specific rotation）
- 出具一份lot-to-lot bridging report，纳入batch records
这一步看似冗余，但FDA审评员在audit reference standard system时会专门看。FDA 2026年4月发布的Compliance Program 7346.832M（Prelicense and Preapproval Inspections of CDER-Regulated Biological Product Manufacturers）里，"Evaluation of the Laboratory Control System"这一节明确把"test sample and reference standard tracking and storage"列为必查objective。这是FDA pre-license inspection的常规检查项，不是临时增加的。
痛点五：cGMP环境下的reference standard control。Reference standard的接收、检验、入库、分装、储存、发放、销毁，都应纳入cGMP管理。中国部分公司把reference standard放在普通-20°C或4°C冰箱里，没有温度监控、没有出入库记录、没有CCM（chain of custody）。FDA pre-approval inspection时，这种setup是高风险finding。
应对：建立reference standard management system。要素包括：
- 专用的reference standard储存设备（温度连续监控）
- 唯一编号系统（涵盖供应商批号、内部编号、qualification状态）
- 发放与归还的双签字记录
- 用量追踪（每个测试动用多少、剩余多少）
- 报废处理流程
- 年度库存盘点
qNMR：从工具到标准
近几年quantitative NMR（qNMR）在reference standard qualification里的地位显著上升。USP 2024年正式发布《Application of USP General Chapter <1220> in the Development of a Procedure for Quantitative NMR》，标志着qNMR被纳入reference standard qualification的主流方法。
qNMR的核心价值：
- 提供absolute purity数值（不依赖外部参考的相对purity）
- metrological traceability可以追溯到SI单位（kg为基准的质量分数）
- 一次测量同时给出identity和purity
- 适用范围广（小分子、肽、糖类、某些大分子）
实操层面，qNMR需要：
- 高场NMR（一般是400MHz以上）
- Certified Reference Material作为internal standard（如DSS-d6、benzoic acid CRM等）
- NMR仪器的IQ/OQ/PQ完整文档
- 按USP <1251> "Weighing on an Analytical Balance"的天平精度
- 验证好的data processing流程
中国仿制药公司的NMR能力在工艺研发上已经成熟，但用于reference standard qualification的qNMR体系，仍处于早期建设阶段。出海项目里，qNMR数据是CMC包里的"硬通货"——它能显著降低FDA对purity数值的质疑。
DMF和CEP路径下对照品的特殊考虑
中国API出口到欧美，多数走DMF（Drug Master File）路径，部分走CEP（Certificate of Suitability）路径。两种路径对reference standard的要求略有不同。
DMF路径：DMF holder（中国API厂）需要在DMF里描述自己用什么reference standard做QC，以及reference standard的qualification path。Reference standard本身可以不公开（特别是impurity reference的合成路线可能是商业秘密），但qualification的rigor必须足够。FDA在ANDA审评时会通过reference到DMF的方式审视reference standard。
CEP路径：EDQM对reference standard的要求更直接。CEP申请的Module 3里需要明确reference standard的来源、qualification、批次管理。EDQM每年会发布Ph. Eur. Reference Standards的更新list，CEP holder应跟随。
注意点：DMF和CEP都不接受"模糊的qualification声明"。"使用经验证的reference standard"这类表述会被发CR。需要的是具体内容：批号、qualification方法、qualification日期、retest date、stability data。
国内对照品供应商的崛起与陷阱
中国本土的reference standard供应商在2020-2026年快速发展。中国食品药品检定研究院（NIFDC）发布的国家药品标准物质（NRS）覆盖度逐年扩大；上海安谱实验科技、阿拉丁试剂、TLC PharmaChem、罗恩试剂等商业供应商提供大量impurity reference和related substance。
中国出海项目使用国产对照品的两个核心考量：
接纳度问题：FDA和EMA对NRS的接纳度低于USP/EP。中国出海仿制药公司在ANDA里以NRS作为primary reference的几乎没有，都是把USP/EP作为primary、NRS或其他二级供应商作为secondary。
资质化文档问题：国内部分供应商的documentation按NMPA的要求做，欧美要求的mass balance、uncertainty estimate、ISO 17034认证文档可能不齐全。出海项目里需要逐家评估supplier的documentation gap。
总的判断：国产对照品作为日常QC的二级标准是可用的，但primary standard位置在出海项目里目前仍由USP/EP占据。NIFDC近几年在和USP的标准互认上有进展，但产业层面尚未到"全替代"的阶段。
BLA和复杂制剂的特殊性
ANDA和小分子NDA的reference standard相对成熟，但BLA（biologics）和复杂制剂（complex generics、long-acting injectables、ophthalmics）有独特的挑战。
BLA的reference standard：生物制品的reference standard常常是产品自身的"in-house reference"——用一个工艺批次的产品作为参考，对所有后续批次做relative比较。这种setup需要：
- 一个完整characterized的reference lot（通常是一个pivotal clinical lot或PPQ lot）
- Reference lot的稳定性研究（往往是产品life cycle中最长的稳定性研究）
- Two-tiered reference system：working reference（routine QC）和primary reference（用于qualify working reference）
- Reference lot更换的桥接protocol
这一层的复杂度是小分子项目的5-10倍。中国生物类似药公司在出海时常常低估了这一块的工作量。
复杂制剂的reference standard：吸入剂、长效注射剂、眼科产品、透皮制剂的复杂性来自dosage form本身。Reference standard可能需要覆盖drug substance、特定excipient、polymeric carrier、metabolites。USP在2024-2026年陆续发布了一些复杂制剂相关reference的monograph，但覆盖度仍然有限。
给出海项目的几个工程化建议
基于上面这些观察，给中国出海CMC团队的几个具体建议：
建议一：项目启动时建立reference standard plan。Pre-IND或ANDA开发启动时，CMC团队应当输出一份reference standard plan，列出每个需要的reference（API、所有specified impurity、relevant degradant、可能的nitrosamine impurity），标注每一个的source（USP/EP/自合成/商业二级）、qualification status、库存量、用量预测。这份plan随项目推进持续更新。
建议二：reference standard审计要早做。FDA pre-approval inspection和EMA Type II variation inspection都会专门看reference standard system。在ANDA递交前的6-12个月，CMC团队应当做一次内部审计，模拟监管检查角度，识别gap，做完CAPA。
建议三：把reference standard供应商纳入正式supplier qualification体系。和API供应商、辅料供应商同等对待。要有supplier audit、quality agreement、change control flow-down条款。
建议四：把qNMR能力建起来。如果公司有NMR能力，把它扩展到reference standard qualification层级。如果没有，签约一家有qNMR能力的third-party lab（如LGC、Eurofins、SGS）作为strategic partner。
建议五：BLA项目的reference lot要早规划。在Phase 1 IND前就应想清楚未来BLA的reference lot来源。理想情况下，Phase 3 pivotal lot或PPQ lot作为BLA primary reference，需要充足的体积、严格的储存、完整的characterization data。
建议六：建立reference standard的"早期预警机制"。USP的out-of-stock、批次切换、specification revision都可能影响项目。订阅USP的reference standard更新通知，monthly review你的关键reference standard的status，提前应对。
结语
对照品和杂质对照品看上去是CMC包里的"基础设施"——好像应该是默认就有的东西。实际操作里，它是中国API、仿制药、生物类似药、复杂制剂出海过程中最常被低估、最容易拖后腿的环节之一。
FDA每年的ANDA RTR数据，杂质justification不充分、reference standard不到位是稳定的top 5理由。对一家把ANDA从准备到批准做了2-3年的中国公司来说，因为reference standard的documentation gap被RTR，是最痛苦的失败模式——所有的临床、稳定性、工艺验证、分析方法验证都做了，最后卡在一个本来可以提前6个月处理掉的细节上。
把reference standard供应商管理从"采购问题"升级到"质量战略问题"，是中国仿制药出海公司从合规追赶者转向稳定运营者的标志之一。
参考资源
- USP General Chapter <11> USP Reference Standards
- USP General Chapter <1086> Impurities in Drug Substances and Drug Products
- ICH Q3A(R2) Impurities in New Drug Substances
- ICH Q3B(R2) Impurities in New Drug Products
- ICH Q3D(R2) Elemental Impurities
- FDA — Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs (2024)
- FDA — CDER Nitrosamine Impurity Acceptable Intake Limits
- European Pharmacopoeia Chapter 5.12 — Reference Standards
- USP Catalog of Reference Standards
- EDQM CEP Reference Standards Database
- ISO Guide 17034:2016 — General requirements for the competence of reference material producers
- USP <1220> Analytical Procedure Life Cycle (qNMR application)
- NIFDC — 国家药品标准物质 / National Reference Standards (China)
- FDA Compliance Program 7346.832M — Pre-Approval Inspections (April 2026)
- FDA Draft Guidance — Responding to FDA Form 483 Observations (March 2026)
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